如何对荧光共聚焦显微镜进行动态观察？

　　荧光共聚焦显微镜是在荧光显微镜的基础上，配以激光扫描装置，通过可见光激发荧光探针，然后通过计算机图像处理技术获得细胞的图像。不仅可以观察固定的细胞和组织切片，还可以实时动态观察和检测活细胞的结构、分子和离子。
 

　　

　　如何对荧光共聚焦显微镜进行动态观察？

　　

　　1、细胞内钙变化的实时定量测定。

　　

　　2、测量细胞内pH值的变化。

　　

　　激光共聚焦显微镜是测量多种离子浓度并显示其分布的有效工具。聚焦信息的有效识别使得在亚细胞水平显示离子分布成为可能。荧光探针可用于测量单个细胞中的PH值以及活细胞中各种离子(Ca+、K+、Na+、Mg2+)的浓度和变化。一般来说，电生理记录装置和摄像技术可以快速检测细胞内离子量的变化，激光共聚焦技术可以提供更好的亚细胞结构中Ca+浓度动态变化的图像，对研究Ca+的细胞内动力学有意义。

　　

　　3、检测膜电位的变化。

　　

　　单体在低电位时存在，发出绿色荧光，聚集体在高电位时发出红色荧光。随着电位的增加，红色荧光也增加。

　　

　　4、检测细胞中活性氧的产生。

　　

　　5、药物筛选

　　

　　药物、病毒、细菌等的荧光标记。当检测到药物跨膜进入组织或细胞时，可以检测到药物是否进入，其位置含量和动态过程。

　　

　　6、细胞对细胞通信的研究

　　

　　激光共聚焦显微镜可以通过观察缝隙连接分子在细胞内的转移来测量一些传递细胞调控信息的离子和小分子。该技术可用于研究胚胎发育、生殖发育、神经生物学、肿瘤发生等过程中缝隙连接通讯的基本机制和功能，也可用于识别对缝隙连接有潜在毒性的化学物质。

　　

　　7、观察细胞迁移和生长。

　　

　　荧光共聚焦显微镜大大提高了光子产生效率，样品可以与毒性较小的染料结合，以减少每次扫描时激光束对细胞的损伤。LSCM可用于数小时的长期定时扫描，以记录细胞迁移和生长等细胞生物学现象。

　　

　　8、荧光漂白恢复的检测

　　

　　当一个细胞中的荧光分子被激光漂白或淬灭而失去发光能力时，相邻细胞中未淬灭的荧光分子可以通过细胞间的缝隙扩散到漂白的细胞中，从而恢复荧光。该技术可用于分析细胞生物学过程，如细胞内蛋白质转运、细胞膜上的受体流动和大分子组装。