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是利用发光效率高的点光源,通过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发,激发标本中的荧光物质发出各种颜色的光,然后通过物镜和物镜的放大观察。这样,在强反差背景下,即使荧光很微弱,也很容易识别,灵敏度很高,主要用于细胞结构、功能和化学成分的研究。
正置式生物荧光成像系统的基本结构由普通光学显微镜和一些附件(如荧光光源、激发滤光片、双色分光镜、阻挡滤光片等)组成。荧光光源一般采用超高压汞灯(50-200w),可以发出各种波长的光,但每种荧光物质都有一个激发光波长产生*的荧光,所以需要加激发滤光片(一般是紫外、紫、蓝、绿激发滤光片),这样只有特定波长的激发光可以传输到试样,而其他光可以被吸收。每种物质在受到激发光照射后,在极短的时间内发出波长较长的可见荧光。荧光具有特异性,一般比激发光弱。为了观察特定的荧光,需要在物镜后面添加一个阻挡(或抑制)滤光片。它有两个作用:一是吸收和阻挡激发光进入目镜,以免干扰荧光而损伤眼睛;另一种是选择并让特定的荧光通过,呈现特定的荧光颜色。这两个过滤器必须同时选择和使用。
正置式生物荧光成像系统适用于组织和细胞荧光图像采集。与现有荧光显微镜紧密结合,有效提高Z轴分辨率和对比度,去除非焦平面荧光信号;apotome模式和普通模式自由切换;通过蔡司图像处理软件控制拍摄的图像;可实现多通道荧光叠加、时间点映射、三维成像等功能;适用于各种生物荧光图像的采集。