荧光共聚焦显微镜使用紫外光作为光源,样品发光或被荧光染料或荧光抗体染色后,照射待测物,受紫外光激发产生荧光。探测器对其进行探测,在显微镜下观察物体的形状和位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收和运输,化学物质的分布和定位等。荧光显微镜也称为宽视场荧光显微镜。成像面较厚,会观察到焦平面上下的干涉信号,影响实验结果。因此,荧光显微镜只能观察静态的亚细胞结构。那么它与激光共聚焦显微镜的区别在哪里?
1、原理不同
(1)荧光显微镜:荧光共聚焦显微镜以紫外光为光源,照射待测物体,使其发出荧光,然后在显微镜下观察物体的形状和位置。
(2)激光共聚焦显微镜:在荧光显微镜成像的基础上,安装激光扫描装置,用紫外光或可见光激发荧光探针。
2、特点不同
(1)荧光显微镜:用于研究细胞内物质的吸收和运输,化学物质的分布和定位等。细胞中的一些物质,如叶绿素,被紫外线照射后会发出荧光;有些物质本身不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色,受到紫外线照射后也能发荧光。
(2)激光共聚焦显微镜:通过计算机进行图像处理,从而获得细胞或组织内部微结构的荧光图像,在亚细胞水平上观察Ca2+、pH值、膜电位等生理信号和细胞形态的变化。
3、用途不同
(1)荧光显微镜:荧光共聚焦显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它由光源、滤板系统和光学系统组成。用一定波长的光激发标本发出荧光,经物镜和目镜系统放大后观察标本的荧光图像。
(2)激光共聚焦显微镜:激光扫描共聚焦显微镜已用于细胞形态定位、三维结构重组、动态变化过程等研究,并提供定量荧光测量、定量图像分析等实用研究手段。与其他相关生物技术相结合,已广泛应用于形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领域。