3D激光共聚焦显微镜激光被用作扫描光源,以逐点、逐线和逐面快速扫描和成像。扫描激光和荧光采集共用一个物镜。物镜的焦点是扫描激光的焦点,也是瞬时成像的目标点。系统聚焦一次,扫描限于样本的一个平面。当聚焦深度不同时,可以获得样品的不同深度水平的图像。这些图像信息存储在计算机中。通过计算机分析和模拟,可以显示细胞样本的三维结构。在普通的宽视场光学显微镜中,整个标本被汞弧灯或氙灯的光照射,可以用肉眼直接观察图像。同时,来自焦点以外其他区域的荧光对结构有很大的干扰,特别是当样品厚度大于2um时,其影响更为明显。
3D激光共聚焦显微镜摆脱了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式,采用激光束作为光源。激光束通过照明针孔反射到物镜,并聚焦在样品上,以扫描样品焦平面上的每个点。如果组织样本中存在可以激发的荧光物质,激发后发出的荧光将通过原始入射光路直接返回分光镜,并在检测针孔时首先聚焦。聚焦的光将被光电倍增管(PMT)检测和收集,信号将发送到计算机,处理后图像将显示在计算机显示器上。
3D激光共聚焦显微镜作为一种新的实验手段和强大的研究工具,为我们解决以往研究工作中无法解决的一些技术问题创造了条件,并将得到更广泛的应用。它用于测量表面的物理形态,并分析微观和纳米尺度的三维形态,如3D表面形态、2D深度形态、轮廓(深度、宽度、曲率、角度)、表面粗糙度等。可以测试以下要求:
1、检测具有表面磨损、表面粗糙度和表面微观结构要求的精密零件;
2、MEMS、微器件检测、医学工程中的组织结构检测,如基因芯片;
3、半导体:微电子系统检测、封装和辅助产品结构设计;
4、太阳能:电池网格线的三维形态表征和纵横比测量。